時間：2023-03-22 17:36:52
緒論：在尋找寫作靈感嗎？愛發表網為您精選了8篇細胞增殖論文，愿這些內容能夠啟迪您的思維，激發您的創作熱情，歡迎您的閱讀與分享！
患兒11例，平均年齡2-4歲，11例患兒的臨床表現依次為:淋巴結腫大(76%，19/25)，肝脾腫大(72%，18/25)，皮疹(60%，15/25)，骨質浸潤(52%，13/25)，貧血(52%，13/25)，發熱(52%，13/25)，肺部浸潤(44%，11/25)。實驗室檢查血象、骨髓像、肺部x線缺乏特異性表現;骨骼X線病變以溶骨性骨質破壞多見;頭顱CT/MRI為診斷顱底骨質破壞和蝶鞍病變的重要方法。患兒確診為朗細胞組織細胞增生癥。
治療
本病屬于免疫系統疾病，治療該病癥必須增強免疫力，可以注射"免疫抑制劑"治療。
2護理
護理計劃及早制定。患兒所患一種罕見的疾病，盡快確診，積極配合醫生迅速和有效地使所有援助檢查，皮膚科，兒科和其他科室會診。對這種嚴重的疾病評估，獲取相關信息，并與醫生的治療方案，孩子們組織討論，制定了詳細的護理計劃，認真落實和不斷改進的條件，并根據合理的謹慎措施轉變。
2.1發燒護理 密切觀察體溫變化，每天6次測量體溫恢復正常后3天，每天一次衡量，臥床休息，補充營養和液體的溫度后，及時更換汗濕衣服，以防止滴濕疹的發生。
2.2心理護理 兒童有康復的強烈愿望，通過耐心說服，消除恐懼的治療，治療可以有意識地給予精神上安慰。為家長密切合作進行治療。
2.3 高蛋白飲食和營養，高維生素，好食物和合理的原則，以改善機體健康。增加人體的耐受化療，提高免疫力。特殊治療時，如嘔吐，嚴重且難以考慮飲食或靜脈高營養消耗的元素，以確保病人有足夠的熱量，改善營養狀況。
2.4病人的病情在手術前仔細觀察，觀察腹部疼痛，位置，范圍，腹脹情況排氣排便情況的性質，使快速，皮膚準備，術前皮膚測試等，禁用止痛藥，以防掩蓋病情。
2.5 患者手術后回到病房，以枕平臥4?6小時，頭側面，保持呼吸通暢，必要時給予吸氧。麻醉前作出明確，監測有無嘔吐，腹脹，排氣排便情況，保持引流通暢胃腸減壓生命體征及腹部癥狀密切觀察，并觀察引流液，顏色和數量的性質;禁止在食品，良好的口腔護理，根據醫生的意見合理補充水分和電解質溶液;術后早期的半臥位，鼓勵早期活動，防止腸粘連，這將有利于身體恢復;蠕動恢復。適當的飲食應少量多餐，逐漸結束，并觀察是否進食后腹痛，腹脹，嘔吐等癥狀，如果上述癥狀，應暫停進食，看看是否有腸梗阻，吻合口狹窄等并發癥;該觀察傷口無出血，滲液，腫脹，保持傷口敷料清潔干燥，防止尿液污染傷口。
2.6藥物不良反應及護理 對化療藥物的胃腸道不良反應的各種觀測是普遍的。在化療前或口服止吐藥物化療期間的飲食，以減少惡心和嘔吐，靜脈注射30分鐘要輕和消化。做三查七對的。（1）長春新堿導致末梢神經炎，皮膚，肌肉和關節四肢麻木，疼痛，腹痛，肝，腎功能表現應該是保護，注意血液中的變化，低白血細胞分離應該很好對各種感染的保護;（2）高劑量甲氨蝶呤結合6 - MP的時間。使胃腸道反應，口腔炎，口腔潰瘍惡化。重要的骨髓抑制，國會議員在6個半小時，晚飯后口服，每日一次，以減輕反應，同時加強口腔護理，甲氨蝶呤輸液，可能含有冰或冷水，以減少口腔黏膜和菜，氨濃度的甲氨蝶呤（3）VP16的使用，應密切觀察有無泄漏，一旦發現，應立即停止輸液，以避免組織壞死和（或）血酸靜脈炎。 16輸液的副總裁會引起性低血壓，它會促使孩子說謊，緩慢的速度靜脈滴注。
密切觀察病情變化，為爭取更多的搶救時間。密切觀察生命體征。啟用多功能心電監護儀密切監測呼吸，心率，血氧變化，所以在氧氣下降，及時救護。關閉的體溫，體溫過高，及時物理降溫，低溫，溫暖的加強，觀察使溫度維持在正常范圍內，四肢溫暖。遵守一般條件。皮膚兒童，所有的重要器官損傷，嚴重的疾病，快速，并密切觀察皮膚出血，皰疹比以前或加重更好;肝臟是放大或縮小趨勢;觀察的臉部，嘴唇，身體膚色，反應和尿色;觀察胃腸道出血：留置胃管，觀察出血，患兒棕色胃胃內容物后退出了0.6個百分點后，蘇打水洗胃凝血酶鼻飼的效果，但病情反復。由于消化道出血，偶爾空腹的患兒，有低血糖的風險，血糖監測跟蹤，使低血糖的及時修正。血液生化檢驗顯示低血清鈣，補鈣時間，以防止鈣抽搐。皮膚，粘膜的護理。與身體皮膚，頭發，手，有出血，紫癜蓋腳，兒童大量散在皰疹，皰疹損壞個人，每天1:15000高錳酸鉀溶液擦洗，動作輕柔，穿著柔軟的衣服，以免加重皮膚病變，破損的皮膚涂上百多邦。口腔用無菌生理鹽水進行常規口腔護理，以減少感染。患兒躁動時易擦傷足跟部，用無菌紗布加以包扎。加強臀部護理，大小便后及時更換吸濕性好、柔軟的尿褲，保持全身皮膚清潔干燥。適時翻身，以免局部長期受壓。
經過全面、細致的一輪復習后，學生已基本掌握了教材知識，作為二輪復習的重點則應切實加強對新課程標準和2012年考試說明的研究，以此制定復習目標，這樣復習才有針對性和實效性。如：2012年考試說明中對細胞增殖內容的要求。
從近幾年的高考來看，命題重點圍繞細胞周期中染色體行為和數目變化規律，減數分裂與有絲分裂的比較及圖像識別，減數分裂的過程及與遺傳的關系。那么學生在這塊內容中到底還有哪些未落實到位？又該如何幫助學生有效解決這些問題？
一、典型錯誤分析
【典例】圖為雄果蠅體內某細胞分裂過程中，每條染色體上DNA含量變化(甲曲線)和染色體數目變化(乙曲線)。請據圖回答：
(1) CD段細胞中有( )條染色體，DE段有染色單體( )條，FG段細胞中有DNA( )個，DE段可形成四分體( )個。
(2)在A點若用3H標記該細胞的DNA雙鏈，再將其轉入不含3H的培養基中
培養，在FG段一個細胞中的染色體總數和被3H標記的染色體數分別為( ) ( )。
(3)若該細胞基因型為AaXbY，在分裂完成后產生了一個AYY的，則另三個的基因型分別為( )( )( )。
(4)該細胞某一條染色體的兩條單體相同位點出現不同基因的變化可發生在( )段。
該題考查目標：有絲分裂與減數分裂的曲線辨析，減數分裂中染色體、DNA、單體的數目變化規律，染色體、DNA、脫氧核苷酸鏈之間的關系，及減數分裂與生物變異的聯系。通過學案反映出學生存在以下幾方面的問題：
1.基礎知識不扎實，記憶不牢，知識點混淆。例如：在第(1)小題中學生由于把果蠅染色體數4對記成了4條從而造成CD段錯寫為含4條染色體。由于不明確四分體的概
(3)糾錯補偏，反思內化。有一句教育的真理“世界上最有價值的習題不是專家出的習題，而是自己做錯的習題”。二輪復習抓錯題相當機的導航燈一樣，它可以幫我們指明前進的方向。學生在一輪復習中已做了大量試題，經歷了多次模擬考試，難免出現許多錯誤，若能指導學生將這些錯誤進行分類整理，就會發現反復出錯的地方就是自己知識上的薄弱環節，這時就可針對性地翻閱書本，結合書本來解決知識漏洞，當然有些錯誤可能是學生不注意使用生物科學術語回答，畫圖表、寫實驗設計不規范嚴謹等造成的，通過糾錯也可有效提醒學生對自己這方面問題的關注。
二輪復習不做題不行，但沉迷于題海也不行，關鍵要提高做題質量。總結歸納常見題型的解題規律、方法技巧，從而達到弄懂一道題，旁通一類題的目的。也可通過演練近幾年的高考真題親身感觸高考題的命題思路、設問方式，從中感悟解題技巧。
3.消除情感夢魘，增強自信。 美國著名心理學家Robert Rosenthal曾做過這樣一個實驗：他從某個班級的花名冊中隨意挑選了幾個名字，并且告訴老師這些學生經過測試智商較高。之后，老師便關注并鼓勵他們，這些學生也由于有了自信而努力學習。八個月之后，那些“高智商”的學生的成績竟有了驚人的進步。這個實驗證實了自信的重要性。那么如何增強學生對考試的自信，以實現從容應考呢？
(1)充分的考前準備：多數學生都有這樣的體會：“一看到考題不難，緊張不安的情緒便會隨之減少，腦子不再麻木，思維也變得靈活了。”因此，考前一定要做好知識與技能雙重準備，并針對考試中可能出現的復雜情況，進行有目的的訓練，做到胸有成竹，考試當然也充滿信心。
(2)適當的心理調節：既要正確對待壓力，但也不能給自己增加壓力。不過多去想考試成敗將會給自己帶來什么后果，尤其不夸大考試成敗的影響，樹立“天生我材必有用”的廣闊意境。
【摘要】文章對生產制造企業價值鏈及價值鏈分析理論進行總結,指出價值鏈分析在制造企業內部物流成本管理中的運用有極強的優越性。
【關鍵詞】價值鏈分析;制造企業;內部物流成本管理;運用
物流成本作為企業“第三利潤源泉”,倍受各方的關注。物流成本管理的意義在于:通過對物流成本的有效把握,利用物流要素之間效益背反關系,科學、合理地組織物流活動,加強對物流活動過程中費用支出的有效控制,降低物流活動中的物化勞動和活勞動的消耗,從而達到降低物流總成本,提高企業和社會經濟效益的目的。
目前,造成中國物流成本居高不下的關鍵因素是制造業,困擾商品流程優化的還是制造業。為了提高制造業的競爭力,要求從業人員能夠對原材料、半成品、產成品以及相關的信息流動做到7R,即正確的產品、正確的質量、正確的條件、正確的顧客、正確的地方、正確的時間、正確的成本。這也正是現代物流管理的實質。制造企業的物流成本管理中引入價值鏈理論,能對企業內部物流作業流程進行持續改善,以消除不必要的作業;通過對物流成本進行評價,分析確立物流成本控制環節,有利于幫助企業降低物流作業成本。
一、價值鏈及價值鏈分析方法
信息技術的廣泛應用,使企業從價格競爭、產品競爭和個體競爭轉向價值競爭、服務競爭和網絡競爭,而持續的核心競爭優勢對于企業后一種情況的競爭具有更加重要的戰略意義。價值鏈作為確定企業核心競爭優勢的一種基本工具應運而生。它是一種系統性研究企業競爭優勢的方法,其核心內容是分解企業價值鏈、確定價值活動成本,以價值最大化為目標重構價值鏈,建立其優化結構,從而提升企業的核心競爭優勢。價值鏈的優化研究經歷了從邁克爾·波特的傳統價值鏈、Peter·Hines的“集成物料價值的運輸線”、JefferyF1Rayport和JohnJ1Sviokla的虛擬價值鏈,再到價值網理論的一個長期過程。
價值鏈已經發展成為當代網絡經濟環境下的一種組織戰略思想和模式,它是以企業儲運、生產、銷售、服務等業務流程為載體,以實現顧客價值最大化為直接目標而形成的企業內部價值活動的系統性結構,為企業形成信心競爭優勢、創造長期利潤提供了一種系統的、動態的分析方法。
(一)生產制造企業的價值鏈
現代企業管理思想認為企業是一個為最終滿足顧客需要而設計的一系列作業的集合體,企業本身就是一個由此及彼、由內到外的作業鏈,每完成一項作業要消耗一定的資源,而作業的產生又形成一定的價值,轉移到下一個作業,依此轉移,直至形成最終產品,提供給企業外部顧客。而最終產品作為企業內部作業鏈的最后一環,凝結了各個作業鏈所形成并最終提供給顧客的價值。因此,作業鏈同時又表現為價值鏈,作業耗費與作業產出配比的結果,就是企業的盈利。價值鏈由多個作業組成,價值鏈內信息的傳遞基本上具有雙向特征。根據價值鏈各個環節的特征,價值鏈可分為外部價值鏈和內部價值鏈。外部價值鏈包括企業、供應商、客戶等;內部價值鏈主要包括生產活動的作業活動等。
(二)內部價值鏈分析
低成本是企業取得任何競爭優勢的有利保障。企業應在營造企業核心競爭力的前提下,對內部價值鏈進行分析,主要是為了解決降低企業內部成本問題。而這些分析工作都是以“作業”為中心,在整個過程中還須結合事前管理的統籌規劃、事中管理的實時控制和事后管理的分析考評,以確認企業的價值活動有哪些,處于什么樣的分布狀態,并將每個價值活動所耗費的成本與對產品價值的貢獻相比較,根據企業各個作業活動在價值增值中的不同作用,將其進行細分并采取措施加以改進。
內部價值鏈分析是將從基本的原材料到企業最終用戶之間的價值鏈分解成作業活動,以便理解成本的性質和差異產生的原因,通過差別分析和成本分析,找出企業在價值生產過程中的利弊。企業為了實現其“股東價值最大化”的經營目標,必須提高其作業產出,減少作業耗費,但并非所有的作業都能夠創造價值,這就需要溯本求源,分析哪些作業能夠增加價值,哪些作業不能增加價值,并盡可能消除不能創造價值的作業,即使能創造價值的作業,也應盡可能減少其作業耗費,這一切都要借助于作業分析。為此,作業管理(Activity-basedManagement簡稱ABM)作為一種現代企業管理方法由此產生,作業分析主要過程如下:
1.確定作業。確定企業的價值生產過程,根據作業對競爭優勢的貢獻大小區分作業,從而確定產品或服務的總成本構成。
2.評估作業。識別各過程的中間環節,從而確定獲得相關成本優勢的機遇。每項物流作業之間不是完全獨立的,在同一條價值鏈上是相互依賴的。例如,企業產品制造的實現必須依賴于原材料的儲備以及運輸,而這種相互之間的依賴性有時也會造成一些不必要的重復操作,從而影響整體的效率以及效益。因此,通過價值鏈分析法辨別出冗余環節,按各個作業活動在價值增值中的作用不同,將其細分為直接增值作業活動、輔助增值作業活動、非增值作業活動和逆增值作業活動,從而確定價值創造過程中的核心環節。
3.優化作業。通過對作業活動的評估,擬定改進方案。對于直接增值作業活動,應在保持其增值效果不降低的前提下,盡可能提高運行效率,減少資源耗費和占用;對于輔助增值作業活動,有必要在維持其輔助作用不變的情況下,盡可能減少資源占用;對于非增值作業活動和逆增值作業活動,則應盡可能減少和避免,達到優化作業的目的。
同時,管理深入到作業水平,進行作業分析,就要求變革傳統的成本計算,使其與之相適應,即要求成本計算深入到每一作業,進行作業成本計算。由此,基于企業價值鏈的作業成本法應運而生。
二、價值鏈分析在制造企業內部物流成本管理中的運用
對于生產制造型企業來講,生產制造賦予了最終商品的大部分價值,是企業的核心業務單元。另外,現代的制造型企業在不斷加大生產力度的同時也十分注重客戶的售后服務,不斷加大其在產品價值增值過程中的作用,從而逐漸地形成企業的核心競爭力。
企業的物流過程從價值鏈角度分析,不但有利于節省自身的業務運作時間、合理利用資源,而且有利于為最終的顧客提供最有價值的服務,在企業的物流鏈上找到價值增值過程中貢獻最大的核心環節。同時,利用價值鏈分析法企業的物流活動也不再簡單地以全面削減成本為目的,而是在各價值生產過程中降低成本、提高效率。
制造業企業內部物流主要包括:供應物流,即上游企業對本企業所需物資供應的物流活動;原材料、零配件部件物流,即企業內部所需要原材料、零配件部件從供應倉庫或者上游企業直接供應到生產線的物流活動;半成品物流,即生產過程中的半成品從上一道工序(或車間)到下一道工序(或車間)的物流活動;產成品物流,即生產出的成品或最終產品,從生產線到產成品倉庫或者直接到下游企業的物流活動;回收物流,即生產過程中的廢棄物丟棄或再生所發生的物流活動。
內部物流的合理化可以促進生產過程中資源配置的合理化和工藝流程的合理化,從而大大提高制造業企業的競爭力。目前,許多企業已經開始意識到內部物流管理對于降低成本、提高物流效益,改善企業管理的重要作用,紛紛優化企業內部物流管理,建立內部物流部門,對訂單、庫存、運輸、倉儲、加工等物流各環節或全過程實施高效的管理計劃和控制,促進企業可持續發展,增強企業核心競爭力。
但現有企業內部的物流管理存在著許多軟肋與制約:
一是傳統的管理理念、機制、方式等影響企業內部物流效率的提高。轉二是企業內部物流環節縱、橫向聯合薄弱。
三是物流成本核算缺乏財務標準,責任主體不清,物流管理效益難以凸現。
四是對現代物流的研究較滯后,缺乏專業人才,實際操作經驗少等。
三、基于價值鏈分析方法的優越性
基于價值鏈分析的成本觀是成本管理從價值保證和價值增加兩個視角來進行的。由此,價值鏈成本管理實際上也就具有了雙重的性質:一是控制資源的必要而足夠的投入,從而保證顧客價值(表現為保證提供合格產品);二是控制資源的耗費,以提供盡可能多的顧客價值(表現在保證質量前提下的較低價格)。
通過價值鏈分析,對外能識別并確保企業在行業或產業中的優勢地位和核心地位,從而能夠在整體價值鏈顧客價值最大化的前提下,通過價值讓渡等方式結成戰略聯盟而形成優勢價值鏈聯盟,以使企業確保自身的優勢戰略定位;對內運用價值鏈分析法來考察企業各項活動及其相互關系,能夠盡可能消除不增加價值的作業,降低可增加價值作業的資源消耗,能更全面地分析企業成本的構成,從而避免使用傳統成本管理方法的缺陷。
因此,基于價值鏈的成本管理具有以下優勢:
(一)充分考慮了降低成本的相對性問題
成本的降低有絕對成本降低和相對成本降低之分。絕對成本降低是通過一定的途徑使成本的發生額低于一定的水平(標準或預算);相對成本降低是將成本與作業的質量、效率以至最終與企業效益聯系起來,它并不單純追求成本絕對額的降低,而是追求成本效益的不斷提高。
(二)抓住了成本管理的關鍵即作業問題
基于價值鏈的成本管理從研究導致成本發生的作業及作業結構開始,通過對作業及作業結構的優化、改造來達到提高成本效益的目的,因而這種成本管理抓住了成本問題的關鍵。
(三)擴大了傳統成本管理的控制范圍
基于價值鏈的成本管理在研究成本問題時不僅要考察生產作業,還要考察非生產作業;不僅考察基本作業,還要考察輔助作業;不僅要考察本企業的價值鏈,而且要考察競爭對手、供應商、銷售渠道、顧客甚至整個行業的價值鏈,以尋求廣泛提高本企業成本效益的途徑。
(四)更為全面地考慮了成本管理中的相關問題
基于價值鏈的成本管理追求的是整個價值鏈效益的優化,這就要求成本管理須正確處理作業與作業之間,業務流程與業務流程之間,本企業價值鏈與供應商、銷售渠道之間的關系;要求通過優化這些關系來提高整個價值鏈的效益,而不能為獲得局部利益損害整體利益,也不能為了短期利益而損害長期利益。
【參考文獻】
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[2]吳普松.價值鏈下的作業成本法:理論分析與中國實際[J].集團經濟研究,2006(3).
動脈硬化性閉塞癥（ASO）是由于全身動脈粥樣硬化，形成動脈管腔狹窄，甚至繼發性血栓形成，發生阻塞，引起患肢慢性或急性的缺血癥狀，甚者發生壞疽，重者可危及生命。近年來，隨著我國人民生活水平的不斷提高，飲食結構的不合理以及人口的老齡化，ASO的發病呈明顯上升趨勢[1]，此病屬于中醫“脫疽和脈痹”范疇，祖國醫學認為本病多因飲食失節，膏粱厚味，損傷脾胃，濕濁內生，痰瘀互結，阻塞經脈；或因氣血虧虛，運行無力，脈絡瘀阻，氣虛血瘀，經脈痹阻，氣血不達四末而發為脈痹；或因肝腎虧虛，氣竭精傷，腎水消灼，筋煉骨枯，終成脫疽之癥[2]。
1治療現況
中醫對本病的病機尚未有一個統一的標準，臨床治療多辨證使用益氣活血，養陰清熱，健脾祛濕，溫經通絡，補益肝腎，溫陽散寒，活血化瘀，或配合中藥外洗外敷等方法，多數醫家認為瘀血內阻是本病的基本因素。因此，活血化瘀應貫穿疾病始終，臨床上也多以活血化瘀方劑為主，療效確定。西醫治療方法主要有藥物治療、手術治療、介入治療。藥物治療包括抗栓和擴張血管治療，積極的治療高血壓、高血脂，防治動脈硬化，穩定斑塊，防止斑塊破裂。手術治療主要指重建肢體血運，包括動脈內膜剝脫術、血管旁路移植術和血管腔內治療術；ASO的介入治療仍局限于短段病變，短段主髂動脈病變的球囊擴張和支架置入術效果較好；此外，隨著狹窄的逐漸形成，肢體的側支循環隨之逐漸建立[3]，使得一些醫家逐漸注意到利用血管內皮細胞生長因子等誘導血管生成的基因治療。
2補腎與動脈硬化性閉塞癥關系
動脈硬化性閉塞癥多見于中老年患者，人到中年以后，腎中精氣逐漸減少，出現腎虛。腎陰虛則臟腑百脈、形體器官失充，血液凝澀，脈絡失養，則患者表現為肢端色黑壞死破潰，劇痛，夜不能眠，肢端潮紅或暗紅，肢體肌肉明顯萎縮，皮膚干皺、口渴、便秘、溲赤，發熱；腎陽虛則陽氣虧虛無力推動、溫煦氣血以榮四末，致血行遲緩不暢而瘀，則指（趾）端壞疽或潰瘍、四肢發涼，患處皮膚溫度較低，膚色蒼白，脈搏減弱或消失等。筆者認為腎虛是造成本病血脈閉塞的關鍵環節，在治療本病中補腎也起著關鍵的作用，鹿茸性甘、咸、溫，歸肝、腎經，具有補腎陽、益精血、強筋骨、調沖任、托瘡毒之功效，鹿茸對動脈硬化閉塞癥的防治作用主要有以下幾點。
2.1鹿茸可促進血液生成和血行中醫認為，鹿茸可使人體腎精充盛，防止衰老，壯腎陽，腎陽可促進機體的溫煦、運動興奮和化氣功能，使氣的運動加快，則血的輸布運行也加快，氣化加快則產熱增加，使溫煦作用加強，使陽虛患者患肢血脈得到溫養而減輕病情。鹿茸還可益精血，強筋骨，為血肉有情之品，使動脈硬化性閉塞癥患者患肢血液充足，血脈得到濡養，有助血行。李召[4]研究發現鹿茸對正常及白血病骨髓與人骨髓單個核細胞有促增殖作用，能促進骨髓造血，而且鹿茸有抑制紅細胞凝集和促進纖維蛋白溶解的作用[5]。
2.2鹿茸可促進血管新生鹿茸在治療動脈硬化性閉塞證中還和促進血管新生有關，研究發現溫陽藥物鹿茸能促進人骨髓間質干細胞的增殖活性，而骨髓是一個天然的細胞生長因子庫，在其生長過程中，成骨細胞、神經細胞、成纖維細胞及上皮細胞的生長同步進行[6]，血管內皮細胞的祖細胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）主要存在于骨髓。何秀娟等[7]發現鹿茸能促進離體人臍靜脈內皮細胞的增殖，提示在體內可能促進EPCs的增殖，促進血管生成。血管內皮祖細胞是成年個體中與血管新生關系最為緊密的干細胞成分，是血管內皮細胞的前體細胞，EPCs的增殖、趨化、分化，參與新生血管的形成，它可以被細胞因子或者來自于外周血中的血管生長因子信號動員到外周循環而進入外周血管組織中，通過整合到血管壁或提供生長因子兩種方式來促使新生血管的形成[8]，新生的血管為缺血部位提供氧、營養物質和生物活性物質，進一步促進缺血部位血管新生，改善缺血狀態。中醫認為腎主骨生髓，骨者，髓之府，因此，補腎可生髓，從這點也提示了鹿茸可以促進骨髓增殖。血液中的內皮祖細胞對組織缺血有反應，人外周血中培養擴增的EPCs，在肢體缺血的動物體內，能夠特異性地向缺血部位趨化，參與血管生成，增加毛細血管數量，具有改善組織血流的治療作用。向缺血部位趨化的具體機制還不清楚，可能與缺血所造成的局部低氧血癥、缺血組織釋放的某些細胞因子和炎性因子，對這些細胞的趨化可能發揮了一定作用[9]。
2.3鹿茸可促進瘡口愈合中醫認為鹿茸有托瘡毒之效，可用于瘡瘍久潰不斂，或陰疽內陷不起，可溫補精血，托毒外出和生肌之效，對于動脈硬化閉塞癥后期出現的破潰反復難愈有托毒和生肌之功，可促進瘡口愈合。現代醫學發現，馬鹿茸多肽通過促進表皮細胞和成纖維細胞增殖加速皮膚創傷愈合[10]。
3小結
鹿茸性甘、咸、溫，歸肝、腎經，具有補腎陽、益精血、強筋骨之功效，可用于腎陽不足、精血虧虛、筋骨無力之癥，為補腎之良藥。這從傳統理論方面提示了鹿茸具有促造血，緩解肢體不適之功效，筆者在臨床中也遇到此病患者甚多，常給予芪芍復脈湯[鹿茸2g（研末沖服），黃芪30g，白芍18g，桂枝10g，當歸15g，麥冬15g，玄參15g，川芎10g，全蝎10g，川牛膝15g，土元10g，烏藥10g，丹參30g，三七粉3g，阿膠6g，甘草6g]，隨癥辨證加減，意在用芪芍復脈湯益氣活血，滋陰復脈，加鹿茸意在溫補腎陽，又補益精血，強筋骨，恢復陽氣溫煦推動之力，使精血充盛，臨床應用，效果顯著，而且許多患者在病情好轉的同時病變部位血管彩超發現新生血管且血流通暢。
現代研究認為鹿茸多肽既對表皮細胞和成纖維細胞具有顯著的促進增殖作用，加速創面愈合的質量和速度，又可促進血液運行，促進血管內皮細胞的增殖分化和遷移，促進病變部位血管生成，這些都表明鹿茸對動脈硬化性閉塞癥的防治有著積極的作用，加之中醫認為鹿茸乃血肉有情之品，可以補腎填精，由以上可以推斷，鹿茸骨髓EPCs促進血管新生，鹿茸是否還具有把EPCs動員到外周缺血組織的作用，是否需要益氣活血類藥物來促進它的轉移，這些還有待進一步的實驗及臨床觀察，但這一發現對缺血性疾病的治療提供了一個新思路。董蔚等[9]在體外擴增EPCs的基礎上，進一步觀察了EPCs在動物體內促血管生成的作用，EPCs可特異性地分布在缺血肢體的血管結構中，缺血部位的側支循環形成和毛細血管新生可能與外源性血管生長因子、基因或內皮祖細胞轉入組織中有關，我們可以發現和利用一些藥物或生長因子促進EPCs表達、促進EPCs從骨髓向外周動員，提高循環中的血管內皮祖細胞的數量，或通過移植體外擴增的EPCs來增強缺血組織的血管再生，從而促進新生血管的形成。鹿茸在治療動脈硬化性閉塞癥中起著重要的作用，隨著對其作用機制的深入研究，很有可能尋找到治療ASO的有效途徑。
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[8]武麗萍，馬華.血管內皮祖細胞與血管新生[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2008，6（8）：946948.
【關鍵詞】 雷帕霉素； 肝移植； 冷保存； 再灌注； 膽管上皮細胞； 增殖
【Key words】 Rapamycin; Liver transplantation; Cold preservation; Reperfusion; Biliary epithelial cells; Proliferation
1 材料與方法
1.1 主要試劑與儀器
兔抗增殖細胞核抗原多克隆抗體、鼠抗pSTAT3tyr705單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司；ChemMateTM Envision免疫組化試劑盒為丹麥Dako公司產品；RPM為美國惠氏百宮制藥公司惠贈。
1.3 各組術后生存分析
1.4 肝功能指標檢測
1.5 兔抗增殖細胞核抗原、α平滑肌肌動蛋白免疫組織化學檢測
肝組織常規固定、包埋、切片。采用兔抗增殖細胞核抗原作為細胞增殖期G1S期的評價指標，α平滑肌肌動蛋白作為肌纖維母細胞標志。按ChemMateTM Envision免疫組化試劑盒說明書操作。顯微鏡下觀察α平滑肌肌動蛋白表達陽性細胞的胞質呈棕色，增殖細胞的胞核呈棕色。計算7個高倍鏡(×400)視野內，每100個膽管細胞中增殖的膽管上皮細胞所占比例的均值作為該樣本的膽管上皮細胞增殖率［4］。
1.6 統計學分析
計量資料以±s表示，所有數據應用SPSS 10.0軟件進行統計分析，多組均數間的比較采用單因素方差分析，采用KaplanMeier法繪制生存曲線，Logrank法檢驗各組生存率之間的差異。
2 結果
2.1 各組術后生存分析
冷保存12 h組生存率明顯低于冷保存1 h組(P=0.017 4)，而與雷帕霉素組水平接近(P=0.89，圖1)。兩組大鼠死亡的主要原因為移植肝肝功能不全，表現為肝臟淤血或伴有局灶性壞死，腹水、黃疸，肝功能酶譜升高，部分死亡大鼠膽管內可見褐色膽泥形成。
圖1 各組肝移植術后生存曲線
2.2 各組肝功能檢測
2.3 各組膽管上皮細胞增殖
2.4 膽管周圍肌纖維母細胞分布
圖2 肝移植術后膽管上皮細胞增殖(紅色箭頭所示為增殖細胞) (2氨基聯苯胺染色 ×400)
圖3 肝移植術后肌纖維母細胞分布(紅色箭頭所示為肌纖維母細胞) (2氨基聯苯胺染色 ×400)
3 討論
殘存的膽管上皮細胞在對損傷做出再生修復時，雖然最終能恢復到近似原先的細胞形態，但在該過程中極有可能經歷DNA損傷或基因序列改變，具有和正常細胞不同的功能，分泌多種與器官纖維化密切相關的細胞因子如TGFβ等，促進膽管周圍成纖維細胞活化轉化為肌纖維母細胞，而后者的持續出現是器官纖維化過程的關鍵［6］。同時，大量而活躍的細胞分裂需要消耗較多的能量，就有可能削弱肝內非新生細胞正常的能量代謝過程［7］。這對移植物的長期存活及功能是不利的。我們觀察到伴隨著明顯的膽管上皮細胞增殖，較多肌纖維母細胞環繞于冷保存12 h組膽管周圍。這表明嚴重冷保存再灌注誘導的膽管上皮細胞增殖可能是促進肌纖維母細胞聚集的重要因素。由于膽管上皮細胞和膽管周圍肌纖維母細胞之間維持著非常精妙的平衡，冷保存再灌注對膽管上皮細胞的嚴重損傷觸發肌纖維母細胞的大量活化，導致膽管壁創面收縮，增加了膽管壁及其周圍組織纖維化和膽管狹窄形成的風險，在肝外膽管或肝內大膽管常表現為管腔狹窄，在小膽管則可能出現管腔阻塞［8］。我們還觀察到大膽管尤其肝門附近大膽管內壁的膽管上皮細胞增殖最為活躍，該區結締組織豐富，內含大量成纖維細胞，極易受到膽管上皮細胞增殖的影響而活化為肌纖維母細胞。這也許正是臨床觀察到的肝門附近大膽管成為移植肝膽道狹窄易患部位的原因之1，也是影響移植物功能與存活的重要因素。
作為1種新型免疫抑制劑，體外和體內實驗均證實雷帕霉素抑制膽管上皮細胞增殖，其有效抑制濃度遠低于臨床肝移植術后患者應用雷帕霉素作為免疫抑制劑時的血藥濃度［9］。我們的研究也發現，雷帕霉素明顯抑制由冷保存再灌注損傷誘導的膽管上皮細胞增殖，并減少膽管周圍肌纖維母細胞的聚集。雷帕霉素是信號轉導及轉錄激活因子3活化的特異性抑制劑，因而部分阻斷轉錄激活因子3介導的信號通路，從而調控細胞周期進展，影響細胞增殖與分化［10］，這可能是其抑制膽管上皮細胞增殖的分子機制之1。同時我們還觀察到，雷帕霉素雖然明顯抑制肝移植術后膽管上皮細胞的增殖，但并未降低術后14 d內生存率，進1步提示以膽管上皮細胞增殖為靶點的雷帕霉素極可能成為臨床防治移植肝膽管周圍纖維化、膽管狹窄等并發癥的有力武器，將會更廣泛地應用于肝移植領域。
【參考文獻】
［2］ Ramadori G, Saile B. Portal tract fibrogenesis in the liver. Lab Invest,2004,84(2):153-159.
MAPK信號通路在多種惡性腫瘤（包括卵巢癌）細胞的增殖、凋亡和化療藥物作用及化療藥物耐受發生中起重要作用[4-6]。MAPK家族包括p38 MAPK、細胞外信號調節蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）等多個亞家族。這些亞族組成多條信號通路，其中最主要的有P38途徑、ERK1/2途徑和JNK途徑。MAPK家族成員被磷酸化激活后，將細胞外的各種刺激信號傳遞到細胞內，引起細胞內級聯反應，調節細胞的增殖、凋亡及對藥物的敏感性[7]。有研究發現激活的AKT和MAPK，依次磷酸化BAD和BCL-2，進而削弱鉑類和紫杉烷的促進細胞凋亡作用[8]。筆者前期研究發現MAPK信號通路在晚期上皮性卵巢癌組織中異常激活，并發現磷酸化p38 MAPK在耐藥卵巢癌組織中表達較非耐藥卵巢癌組織中升高。
二甲雙胍是一種用于治療2型糖尿病的雙胍類降糖藥，最近兩項大型流行病學調查研究表明：長期服用二甲雙胍能夠降低卵巢癌的發病率，而且二甲雙胍能夠顯著延長卵巢癌合并糖尿病患者的無進展生存期[9]。二甲雙胍通過STK11（也稱LKB1）激活AMPK，激活過程涉及多個參與細胞增殖調節的信號通路，其中包括MAPK信號通路[10]。但二甲雙胍是否能夠增加化療藥物對卵巢癌細胞的敏感性及相關的作用機制研究尚屬空白。
本研究首先觀察二甲雙胍對卵巢癌細胞增殖的影響，以及二甲雙胍是否可增強順鉑的化療敏感性，并通過檢測二甲雙胍對化療藥物相關的重要信號通路MAPK信號通路的調節作用來探討相關的作用機制。以期尋找能提高卵巢癌化療敏感性的新的治療方案。
1 材料與方法
1.1 細胞系和試劑 人卵巢漿液性狀囊腺癌細胞系SKOV3，中、高分化，貼壁生長，購于中國醫學科學院細胞庫，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養。細胞系常規3～5 d傳代。兔抗人p38 MAPK多克隆抗體、兔抗人P-p38 MAPK單克隆抗體；兔抗人AMPK多克隆抗體、兔抗人P-AMPK單克隆抗體，兔抗人GAPDH單克隆抗體購自Cell signaling公司；二甲雙胍、順鉑購自美國Sigma公司，胎牛血清購自杭州四季青公司；Western blotting檢測試劑盒購自武漢博士德公司；Trizol 試劑購自美國Invitrogen公司；BrdU標記及檢測試劑盒購自德國Roche公司。
1.2 方法
1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行處理，組間差異采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 二甲雙胍抑制卵巢癌細胞增殖的情況 二甲雙胍能夠抑制卵巢癌細胞增殖，并且這種抑制作用能夠被Compound C所削弱。隨著二甲雙胍濃度（1×10-3 mol/L，1×10-4 mol/L，1×10-5 mol/L）的增加，其對卵巢癌細胞SKOV3增殖的抑制作用逐漸增強（*P<0.05，**P<0.01）。其中1×10-4 mol/L
和1×10-5 mol/L的二甲雙胍能夠顯著抑制子宮內膜癌細胞的生長。而AMPK阻斷劑Compound C（5×10-7 mol/L，1×10-6 mol/L）均可削弱二甲雙胍的這種抑制卵巢癌細胞增殖的作用。1×10-6 mol/L Compound C與二甲雙胍聯合應用，其對卵巢癌細胞增殖的抑制作用與空白對照組比較差異無統計學意義（P>0.05），見圖1。
2.2 二甲雙胍能夠增強卵巢癌對順鉑的敏感性 將不同濃度的順鉑（1、2、4、6 ng/L）加入卵巢癌細胞SKOV3中，加入或者不加入0.1 mM二甲雙胍孵育細胞48 h后，結果表明：0.1 mM的二甲雙胍聯合順鉑（1、2、4、6 ng/mL）作用于卵巢癌細胞時，順鉑抑制卵巢癌細胞生長的作用顯著增強（P<0.05）。其中6 ng/mL順鉑聯合0.1 mM的二甲雙胍對卵巢癌細胞的抑制作用最顯著（P<0.05），見圖2。
2.3 二甲雙胍聯合p38 MAPK阻斷劑SB203580能夠增強二甲雙胍的抗卵巢癌細胞增殖的作用 單獨應用SB203580（5[dylw.net提供專業寫作論文和服務.]、10 ?M）能抑制卵巢癌SKOV3的增殖，差異有統計學意義（P<0.05）。二甲雙胍（0.1 mM）和SB203580（5、10 ?M）聯合應用對卵巢癌細胞SKOV3增殖的抑制作用顯著增強（*P<0.05，**P<0.01）。其中0.1 mM二甲雙胍與10 ?M p38 MAPK阻斷劑SB203580聯合應用對卵巢癌細胞SKOV3增殖的抑制作用最顯著（**P<0.01），見圖3。
2.4 二甲雙胍激活AMPK信號通路，并抑制MAPK信號通路 二甲雙胍（10、20 mM）作用卵巢癌細胞SKOV3 6 h后，磷酸化AMPK水平顯著增高，且升高的磷酸化AMPK水平能夠被AMPK阻斷劑Compound C所削弱。經二甲雙胍（1、10 mM）處理后，卵巢癌細胞SKOV3中磷酸化p38 MAPK蛋白水平顯著降低，見圖4。
3 討論
最近兩項大型流行病學資料顯示：（1）長期服用二甲雙胍可降低卵巢癌的發病風險；（2）在合并糖尿病的卵巢癌患者中，服用二甲雙胍的患者較未服用患者的無病進展存活率顯著增加[10-11]。筆者研究結果發現，二甲雙胍能夠抑制卵巢癌細胞增殖，這種作用是通過激活AMPK信號通路實現的。AMP激活蛋白激酶（AMPK）是主要的細胞能量調節器，是代謝和腫瘤互相作用的主要調節子[11]。二甲雙胍以一種非胰島素介導的方式直接調節細胞增殖和凋亡，二甲雙胍通過激活AMPK，激活的AMPK調節多個信號通路，其中包括mTOR和MAPK信號通路，最終調節細胞增殖和凋亡。
化療藥物引起的細胞損傷主要是通過、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路實現的，并且化療藥物耐受的形成也與MAPK信號通路激活密切相關[6]。MAPK家族包括P38MAPK、細胞外信號調節蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）等多個亞家族。這些亞族組成多條信號通路，其中最主要的有P38途徑、ERK1/2途徑。MAPK信號通路在多種惡性腫瘤（包括卵巢癌）細胞的增殖、凋亡和化療耐藥產生過程中發揮重要作用[6]。MAPK家族成員被磷酸化激活后，將細胞外的各種刺激信號傳遞到細胞內，引起細胞內級聯反應。有研究發現激活的MAPK，依次磷酸化BAD和BCL-2，進而削弱鉑類和紫杉烷的促進細胞凋亡作用，使腫瘤細胞對化療藥物產生抵抗[12]。筆者的研 究結果表明：二甲雙胍可能通過激活AMPK信號通路，進而抑制MAPK信號通路來抑制卵巢癌細胞增殖的。這與以上研究結果相一致。
筆者的研究結果還發現：二甲雙胍（0.1 mM）能夠增強順鉑抑制卵巢癌細胞增殖作用。與最近的幾項研究結果一致：二甲雙胍能改善乳腺癌化療耐藥，并且發現二甲雙胍的這種對化療耐藥的調節作用是通過激活AMPK實現的[13]。Tseng等[16]在非小細胞肺癌細胞中發現二甲雙胍不僅能夠降低紫杉醇誘導p38 MAPK介導的切除修補基因（ERCC1）的表達，還能夠增加紫杉醇誘導的細胞毒效應。另外在肺癌、乳腺癌和前列腺癌裸鼠體內模型中，二甲雙胍能夠顯著增強順鉑、紫杉醇和多柔比星對腫瘤細胞生長的抑制作用，并且二甲雙胍能夠減少多柔比星的用量，延長疾病緩解期[14-15]。但這些結果說明二甲雙胍可能通過激活AMPK調節腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。
筆者同時發現，二甲雙胍聯合MAPK信號通路抑制劑能夠增強二甲雙胍的抗腫瘤作用。p38 MAPK、p42 MAPK信號通路抑制劑可增加二甲雙胍和紫杉醇的抗腫瘤作用[16]。Liu等[17]在乳腺癌中發現二甲雙胍和mTOR抑制劑（RAD001）聯合可增強化療藥物的細胞毒作用，聯合應用二甲雙胍、化療藥物和mTOR阻斷劑能夠[dylw.net提供專業寫作論文和服務.]協同抑制乳腺癌細胞增殖。Monteagudo等[18]在前列腺癌細胞中，p42 MAPK siRNA能夠顯著增強二甲雙胍的抗腫瘤作用。因此，鉑、紫杉醇化療的基礎上聯合二甲雙胍和信號通路阻斷劑可能會增強卵巢癌化療的療效，這些研究結果都與筆者的研究結果一致。
總之，二甲雙胍能夠提高卵巢癌細胞系SKOV3細胞對順鉑的敏感性，并且這種作用是依賴于AMPK激活的；p38 MAPK阻斷劑SB203580也能夠抑制SKOV3的增殖，二甲雙胍能夠增強這種抑制作用。二甲雙胍的這種增強卵巢癌細胞對順鉑敏感性的作用可能是通過激活AMPK，從而抑制MAPK信號通路實現的。筆者的研究結果為臨床應用二甲雙胍及MAPK信號通道阻斷劑來提高卵巢癌化療藥物的敏感性提供理論支持，為卵巢癌的臨床聯合用藥提供新思路。
參考文獻
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【關鍵詞】 CD24;腫瘤；增殖
Effect of CD24 on cell proliferation capability in melanoma cells
LI Ming, LI Yan, CHEN Wei-qiang, et al.School of Basic Courses, Guangdong Pharmaceutical College, Guangdong 510006, China
【Abstract】 Objective To study the effect of CD24 on the proliferation ability of melanoma cells. Methods B16F10 cells were transfect with pSi-CD24, a siRNA plasmid target to CD24. Then the expression of CD24 was measured by RT-PCR and Western blot and the cell proliferation was assessed by MTT assay. Results CD24 expression was obviously down-regulated by pSi-CD24, and knockdown CD24 can effectively inhibited the proliferation of melanoma cells. Conclusion CD24 can enhance the proliferation of melanoma cells in vitro, which indicated CD24 play an important role in tumor growth.
【Key words】 CD24; Tumor; Proliferation
CD24是一種低分子量高度糖基化的蛋白質粘附分子，作為P-選擇素的配體之一，CD24參與介導單核細胞、中性粒細胞與內皮細胞、血小板之間的粘附。近年來，臨床研究發現CD24高表達于多種腫瘤細胞表面，并且與腫瘤的預后密切相關［1］。對于其作用機制，以往研究較多的集中的CD24與腫瘤轉移的關系上，而CD24在腫瘤增殖中的作用研究尚不十分明確。因此，本實驗用siRNA干擾CD24的表達，觀察抑制CD24表達對細胞的增殖的影響，初步探討CD24在腫瘤生長中的作用。
1 資料與方法
1.1 試劑與儀器 引物、分子量Marker和質粒提取試劑盒(大連TaKaRa公司)；兩步法RT-PCR試劑盒、Trizol 、Lipofectamine 2000 (美國Invitrogen 公司)；抗CD24 抗體和抗β-actin抗體(美國Santa Cruze公司)；ECL化學發光試劑盒(美國Pierce公司)； 蛋白電泳儀、電轉儀、雜交箱和酶標儀(美國Bio-Rad公司)。人黑色素瘤細胞株B16F10為本室保存。靶向CD24的siRNA干擾質粒pSi-CD24由本室構建，按試劑盒說明書提取備用［2］。
1.2 方法
1.2.1 細胞培養和轉染 取對數生長期的人黑色素瘤細胞B16F10細胞，接種于6孔細胞培養板內，待細胞達到80%融合時，按照說明書用脂質體Lipofectamine 2000轉染細胞。實驗分為對照組和pSi-CD24組。
1.2.2 B16F10細胞中CD24 mRNA表達的變化 轉染24 h
后，用Trizol法提取細胞總RNA，按照說明書以Oligo-d(T)18為引物逆轉錄合成第一鏈cDNA，用特異性引物擴增CD24和β-Actin。引物序列和擴增方法見本課題組前期發表的論文［2］。PCR產物用1.5%瓊脂糖電泳，拍照，觀察。
1.2.3 B16F10細胞中CD24蛋白表達的變化 轉染48 h后按照試劑盒操作步驟提取細胞總蛋白，取20 μg樣品煮沸變性后進行SDS-PAGE電泳，轉膜，5 %的脫脂奶粉37℃封閉1 h，加抗CD24(1∶1000)或抗β-Actin(1∶1000)單克隆抗體，4℃孵育過夜，洗膜，加辣根過氧化物酶標記的相應二抗稀釋液(1∶3000) 37℃孵育1 h，ECL法顯影，常規洗片拍照。
1.2.4 pSi-CD24對B16F10細胞增殖的影響 取空白對照組和pSi-CD24組細胞細胞，接種至96孔板上，各組設4孔，在轉染后0、24、48和72 h后加入MIT(5 mg/m1)20 μl，用MTT法檢測細胞增殖情況，并繪制細胞生長曲線。
2 結果
2.1 pSi-CD24對CD24 mRNA和蛋白表達的影響 RT-PCR和Western blot結果顯示，在正常情況下，黑色素瘤細胞B16F10高表達CD24，而轉染重組質粒pSi-CD24后，B16F10細胞中CD24 mRNA和蛋白水平的表達均明顯降低，說明重組質粒pSi-CD24能抑制CD24的表達。結果見圖1。
2.2 pSi-CD24對B16F10細胞增殖的影響 MTT結果顯示，轉染pSi-CD24質粒后，黑色素瘤細胞B16F10的增值明顯被抑制，在48 h和72 h與對照組差異有統計學意義。結果見圖2。
3 討論
RNA干擾(RNA interference, RNAi)是一種簡單有效的基因沉默工具，主要通過誘導序列特異性的mRNA降解，從而產生相應的功能表型缺失，現已被廣泛應用于基因治療和功能基因組學的研究中［3］。在哺乳動物細胞的RNAi研究中，通過質粒等表達載體在細胞內直接轉錄形成siRNA具有經濟和容易操作、作用持續時間長等優點，是目前siRNA最常用的方法。我們前期采用具有RNA聚合酶Ⅲ啟動子的pSilencer 3.1載體，成功構建了靶向CD24基因的表達載體pSi-CD24［2］。本實驗用RT-PCR和Western blot在黑色素瘤細胞B16F10中發現，轉染pSi-CD24質粒后細胞CD24在mRNA水平和蛋白水平的表達較對照組均有明顯降低，說明pSi-CD24可以在細胞內持續表達siRNA, 高效特異地抑制CD24的表達，為進一步研究CD24基因的功能和以CD24為靶點進行腫瘤治療奠定了基礎。
作為P-選擇素的配體，CD24高表達能增強腫瘤的侵襲能力和轉移能力［4］。研究發現，在病理情況下CD24和P-選擇素介導了腫瘤細胞與血小板及內皮細胞的粘附與結合，腫瘤細胞與血小板結合后，形成血小板血栓，可以保護腫瘤細胞逃避免疫監視，降低免疫細胞對腫瘤的殺傷效應；腫瘤細胞和內皮細胞的粘附則有助于腫瘤細胞從循環系統轉移到組織中形成轉移灶，因此，CD24/P-選擇素的結合被認為與腫瘤轉移密切相關。還有研究證實CD24也介導了腫瘤細胞與纖維粘連蛋白等細胞外基質的粘附作用，敲除CD24可以降低SW620細胞的粘附能力［5］。CD24對腫瘤的生長也具有調控作用，Smith等發現敲除CD24基因導致腫瘤細胞凋亡增加［6］。有學者認為這與CD24能促進腫瘤微血管形成有關，也有研究認為與CD24促腫瘤細胞生長有關。本實驗利用siRNA技術敲除黑色素瘤B16F10細胞CD24基因表達，發現抑制CD24表達可以降低細胞的增值能力，說明CD24可能通過某些信號途徑促進腫瘤細胞增殖，進一步證實了上述結果。
綜上所述，CD24在多種腫瘤中高表達，與腫瘤的生長、粘附和轉移密切相關，抑制CD24表達可以降低腫瘤細胞的增殖能力、誘導腫瘤細胞凋亡、阻礙腫瘤的轉移，因此CD24可能是一個治療腫瘤的新靶點，但對其作用機制尚需進一步的深入研究。
參 考 文 獻
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[關鍵詞] 胎盤 細胞凋亡 bcl-2 bax ki67
[論文] 人類胎盤不僅在胎兒—胎盤—母體的關系上起中心軸的作用，而且功能上失調會導致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進展，絨毛和滋養層不斷成熟和分化，已發現許多物質包括原癌基因產物，在胎盤有生理性的表達。胎兒的發展特征是細胞群增殖和誘導或抑制細胞凋亡成熟起來的，因此，胎盤在妊娠期間也經歷著相似的變化。我們通過測定胎盤組織中細胞凋亡調控基因bcl-2、bax及細胞增殖基因ki67，進一步探討了妊娠高血壓綜合征（PIH）的病理性變化。
1 資料與方法
1.1 臨床資料 隨機選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫科大學第二臨床醫院及長春市婦產醫院婦科門診及產科病房的孕產婦66例。（1）妊高征組36例，平均26.14±3.42歲，平均孕37.44±3.9周，輕度9例，中度10例，重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.25±3.80歲，平均孕9.03±1.11周；孕中期5例，平均26.55±3.93歲，平均孕24.05±3.63周；孕晚期（對照組）15例，平均27.76±3.38歲，平均孕39.82±1.32周。
1.2 標本采集及處理 孕早期是行人工流產術者，孕中期是來自無妊娠合并癥、并發癥，要求終止妊娠而行水囊引產者，孕晚期為單胎足月初產婦，無妊娠合并癥、并發癥、以自然分娩及擇期剖宮產手主結束分娩，其剖宮產指標主要是頭盆不稱及社會因素。妊高征組孕婦是無慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。
早孕絨毛組織不需進一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面（避開鈣化、機化灶）隨機取3個不同區域約2cm×2cm×2cm胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。
1.3 方法 用免疫組化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及SP試劑盒均購自福州邁新生物工程公司。每次染色均設陽性和陰性對照。
1.4 結果判定 由2名醫師獨立觀察切片中10個高倍視野。（1）陽性標準：SP法顯示bcl-2及bax定位于胞漿和胞膜內，反應產物為棕黃色。根據顯色程度分為4級：（-）為無著色，（+）為淡黃色，（++）為棕黃色，（+++）為棕褐色;（2）SP法顯示ki67以細胞核呈清晰棕褐色為陽性，按陽性細胞占C-cells的比例分為：陽性細胞數＜10%為（-）；10%-20%為（+）；20%-30%為（++）；＞30%為（+++）。
1.5 統計學分析Fisher精確概率檢驗法，兩組計數資料用等級相關分析。
2 結果
2. 1 正常妊娠期胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2表達主要定位在絨毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈陽性，同時在絨毛間質中bax也呈陽性表達，但強度低于滋養層細胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＞0.05）；ki67在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＜0.01）。早、中、晚期妊娠組bcl-2的表達強度與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。
2 .2 妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在對照組與PIH兩組間差異無顯著性（P＞0.05），bax兩組差異無顯著性（P＞0.05），對照組ki67的陽性率明顯低于PIH組（P＜0.01）。bcl-2與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。
2.3 妊高征胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在輕、中、重度PIH3組間差異無顯著性（P＞0.05），bax在3組間差異也無顯著性（P＞0.05），而ki67在輕度PIH組的陽性率明顯低于中、重度組（P＜0.01）。PIH輕、中、重度組妊娠bcl-2的表達強度與ki67的表達強度經等級相關分析無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。
3 討論
3.1 正常妊娠與妊高征胎盤組織bcl－2、bax的基因表達bcl－2是細胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bcl－2定位在S－cell表達，并且從正常早孕到晚期妊娠持續出現[3，6]，因此保留滋養層細胞團可能是維持妊娠的一種機制[1]。晚期妊娠bcl－ 2表達下降、可能是因為bcl－2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細胞不再需要存活，可能是細胞凋亡的一種早期生物學變化，也可能與分娩有關[2]。
目前已知bcl－2和bax是bcl－2家族中重要成員。bcl－2表達水平較高時，可形成bcl－2和bax的異源二聚體，細胞凋亡受到抑制； bax表達水平較高時，可形成bax－bax同源二聚體，加速細胞凋亡。本研究中，對照組bcl－2與bax的陽性率為66．7％與80％，PIH組的陽性表達均為75％，表明大多數胎盤組織均呈bcl－2與bax高表達。bcl－2和bax表達已在一定水平上達到平衡，所以在胎盤組織中不起介導細胞凋亡的主導作用。
PIH組的bax并無隨病情的嚴重程度而有下降的趨勢，說明bax會進一步影響妊娠的結局，反映病情的嚴重程度。這些結果可能提示，胎盤的細胞凋亡并不是bax單獨起作用，但有待進一步證實。
