時間：2023-03-01 16:26:21
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I'm Li Hua,the leader of the paper-cutting club in our school.l remember you were interested in Chinese traditional culture.now I'm glad to tell you there will be a Chinese paper-cutting exhibition which is held by our school.This is a good chance to have a full understanding about Chinese traditional culture.l really hope you can leave some time for the art feast.
The exhibition will take place in our school hall from 2 to 5 in the afternoon on June 21st. And the theme of the exhibition is "beauty of china".Not only our club 's works will be displayed,but also will we have a valuable set of paper-cutting which is created by a famous artist of this field.what's more,there will be a lot of interesting activities,from which you can know more about Chinese culture.
I would appreciate it if you could accept my invitation.l'm sure this exhibiting will leave you a wonderful impression!Looking forward to your reply.
Beat wishes!
摘 要：目的：探討中藥復方大補陰湯含藥血清對人非小細胞性肺癌H460細胞的生長抑制作用。方法：將小鼠隨機分為正常組、生理鹽水組和大補陰湯組，連續(xù)灌胃給藥7天后，眼眶取血，分離血清；生物倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，MTT法檢測大補陰湯含藥血清對人非小細胞性肺癌H460細胞的生長抑制作用。結果：大補陰湯作用H460細胞48h和72h以后，可見部分細胞變圓，體積變小，有凋亡小體產生。大補陰湯可時間依賴性抑制H460細胞的生長。結論：中藥復方大補陰湯含藥血清可以抑制H460細胞的增殖，為進一步探討其抗腫瘤作用機制提供實驗依據(jù)。
關鍵詞：大補陰湯；血清藥理；H460細胞
大補陰湯為補益類中藥復方，該方出自《丹溪心法》，是滋陰降火的代表方劑。全方由熟地黃、龜板、知母、黃柏和豬脊髓組成。臨床常用于相應的氣虛陰虛病證，體內用藥多起到滿意的療效。近年來的臨床實驗研究發(fā)現(xiàn)。其對慢性再生障礙性貧血、頑固性失眠、出血性疾病及惡性腫瘤等疾病具有較好的治療作用。本實驗引入血清藥理學方法(即體內實驗和體外實驗結合的一種方法)，用服藥后的小鼠血清(含藥血清)代替中藥煎劑作用于體外細胞，研究中藥復方大補陰湯含藥血清對人非小細胞性肺癌H460細胞的生長抑制作用。
1 實驗材料
1．1 藥品與僅器二氧化碳培養(yǎng)箱(HH?CP－1，上海)，生物倒置顯微鏡(AE20，Mode)，96孔培養(yǎng)板(Nune，Roskil-如，Denmark)，胎牛血清(天津灝陽生物試劑公司)，RPMI一1640培養(yǎng)基(GIBCO)，甲基噻唑藍(MTT)，二甲基亞砜(DMSO)。熟地黃、龜板、知母、黃柏(購自遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥局)，豬脊髓(購自家樂福超市)。
1．2 實驗動物昆明種小鼠30只(遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供)，雌雄各半，體重18-22g。
2 方法
2．1 細胞培養(yǎng)人非小細胞性肺癌H460細胞株(Ameri-can Type Culture Collection)，細胞單層接種在含5％胎牛血清，2％谷氨酰胺，RPMI-1640培養(yǎng)液中，在溫度為37℃，C02濃度為5％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2．2 中藥復方液的制備大補陰湯(熟地黃15g，龜板15g，黃柏9g，知母各9g，豬脊髓)，上述中藥復方藥物成分，加水煎煮兩遍，合并兩次濾液，濃縮至每毫升含原中藥復方成分生藥1g。置4℃冰箱保存儲備。
2．3含藥血清的制備昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重18～22g。共分為3組，每組10只，雌雄各半，即空白組、鹽水組和大補陰湯組。連續(xù)7天灌胃給藥，每日1次，每次每只0.4mL/10g。上述連續(xù)灌胃7天的小鼠，于眼眶取血，靜置后離心分離血清10min(2000r/min)，56℃水浴滅活30min，經0.221xm微孔濾器過濾除菌(按1：9的比例將培養(yǎng)液加入原血清中)后，凍存?zhèn)溆谩?/p>
2．4 細胞生長抑制實驗取處于對數(shù)生長期的H460細胞，調整細胞密度為5×104/mL，以每孔100μL接種于96孔板。置于5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，吸出培養(yǎng)液，分別加入培養(yǎng)液、鹽水、大補陰湯的含藥血清液，每組重復3個孔。之后繼續(xù)置于5％C02、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加藥作用12、24、36和48h后，每孔加入10μL MTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清，每孔加入100μL DMSO溶解，酶標儀492nm檢測，繪制時效曲線。
抑制率(％)=[A492(陰性對照)-A492(大補陰湯)]/A492(陰性對照)×100％
2．5 細胞形態(tài)學變化每瓶1×106個細胞的密度接種于50mL細胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24h后加入大補陰湯含藥血清，分別于作用0、12、24、36和48h后用生物倒置顯微鏡觀察。
3 結果
3．1 大補陰湯對H460細胞的生長抑制作用 大補陰湯于不同時間作用于H460細胞后，鹽水組細胞的存活率隨時間的增加而增加，而大補陰湯組細胞的存活率隨時間的增加而減少。可見大補陰湯含藥血清對H460細胞具有細胞毒作用并呈明顯的時間依賴性。
3．2 細胞凋亡形態(tài)學觀察光學顯微鏡觀察，與正常對照組細胞相比，大補陰湯作用于H460細胞48h后，部分細胞變圓，體積變小，少量細胞表面發(fā)芽，細胞變成不規(guī)則狀，芽脫落后形成凋亡小體，凋亡小體呈圓形或橢圓形，在凋亡小體內可見高度濃縮的染色質輪廓，作用72h后，可觀察到凋亡的H460細胞數(shù)量增多，少部分細胞脫落，漂浮于培養(yǎng)液中，亦有少數(shù)細胞體積增大，細胞腫脹、破裂，呈壞死狀。
4 討論
關鍵詞：炙甘草湯；含藥血清；膀胱平滑肌
中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2017）05-0021-05
[WT5HZ][JZ]Effect of Zhigancao Decoction Containing Serum on Rabbit’s Isolated Vascular Smooth Muscle
[WT5BZ][JZ]HAI Qing-shan， YANG Yu-qing， MENG Zo-ran， RU Jing， JIN Ya-ju
[WT5"BX][JZ]（1. School of Basic Medical Sciences， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan； [JZ]2. School of Acupuncture and Massage Rehabilitation， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan）
[WT5HZ]【Abstract】[WTBZ]Objective： To observe the effect of Zhigancao Decoction containing serum on the movement of bladder smooth muscle in normal rabbits and to explore its mechanism. Methods： The activity of bladder smooth muscle in rabbits was recorded by using Powerlab biological signal system. The effects of different concentrations of Zhigancao Decoction on contraction intensity， the contraction frequency and activity of bladder smooth muscle were observed. Results： Compared with the blank control group， the blank serum group and groups of different concentration of Zhigancao Decoction containing serum could increase the contraction intensity of the bladder smooth muscle （the low concentration serum group， P
42炙甘草湯含藥血清對兔膀胱平滑肌收縮頻率的作用如圖2所示，與空白對照組比較，僅低濃度炙甘草湯含藥血清組有明顯的增加膀胱平滑肌收縮頻率的作用。在低濃度含藥血清作用的基礎上，分別用維拉帕米、阿托品和普萘洛爾阻斷鈣通道、M和β受體。結果顯示，阿托品則對膀胱平滑肌的收縮頻率具有降低的效果，說明炙甘草湯含藥血清增加膀胱平滑肌頻率的作用與M受體有關。M毒蕈堿型受體廣泛的存在與平滑肌中，M受體興奮時可引起平滑肌收縮頻率增加。但排除空白血清自身的作用后，低濃度含藥血清組增加膀胱平滑肌收縮頻率的作用就不具有統(tǒng)計學意義了。說明血清中含有興奮M受體的生物活性成分，如乙酰膽堿（Ach）等，可以引起類似的增強膀胱平滑肌收縮頻率的作用。炙甘草湯能否誘導血清中Ach或類似Ach的活性成分的增加，尚無確切的依據(jù)。
43炙甘草湯含藥血清對兔膀胱平滑肌活動力的作用如圖3所示，膀胱活動力疊加了收縮強度和收縮頻率兩個影響因素。低、中濃度炙甘草湯含藥血清組均顯示出增加膀胱平滑肌活動力的作用。排除空白血清自身作用后，低濃度含藥血清依然可增強膀胱平滑肌的活動力。以低濃度含藥血清組作對照，維拉帕米和阿托品均能夠阻斷低濃度炙甘草湯血清的興奮作用。說明，炙甘草湯低濃度含藥血清對膀胱平滑肌的興奮作用可能通過兩條途徑有關，一方面興奮鈣通道，增加Ca2+內流，增加膀胱平滑肌收縮強度；另一方面興奮M受體，增加膀胱平滑肌收縮頻率。但其興奮作用沒有濃度依賴性的增加，可能與其雙向調節(jié)作用有關[1]。說明在劑量增加的情況下誘導機體產生的生物活性物質發(fā)生了變化，興奮作用反而減弱。[KG）]
5結論
低濃度炙甘草湯含藥血清組對膀胱平滑肌條具有興奮作用，隨著劑量的增加其興奮作用反而減弱，這與劑量增加的情況下誘導機體產生的生物活性物質發(fā)生變化有關。炙甘草含藥血清對增加膀胱平滑肌收縮強度和收縮頻率的單一影響不確定，但疊加收縮強度和頻率兩種因素后，低濃度炙甘草湯含藥血清對膀胱的興奮作用確切。通過添加阻斷劑反向證明，炙甘草湯低濃度含藥血清對膀胱平滑肌的興奮作用可能與興奮鈣通道和M受體兩條途徑有關。該機制可能是炙甘草湯對各系統(tǒng)平滑肌作用的共性基礎[4-5]。炙甘草湯興奮鈣通道是通過哪些中間產物[FL）][SD1，1][FQ（11*3/2。175mm，X，DY-W][SQ+1mm][CD=175mm]發(fā)揮作用，興奮M受體的作用是否與Ach相關，其雙向調節(jié)作用的機制與誘導血清內成分改變的關系等，還有待于進一步實驗證明。[KH*1D]
參考文獻：
[1]李曉璇，郭偉星炙甘草湯治療心血管疾病研究進展[J].山東中醫(yī)雜志，2013，32（2）：141-143[ZK）]
[2]艷顏仙君中醫(yī)藥治療室性早搏研究進展[J].新中醫(yī)，2016，48（9）：215-216[ZK）]
[3]郭晶晶，年莉炙甘草湯臨床應用進展研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2015，17（10）：106-109[ZK）]
[4]海青山，鄭梅，鄭慧敏，等炙甘草湯含藥血清對正常家兔離體子宮平滑肌作用的研究云南中醫(yī)中藥雜志，2008，29（11）：48-50[ZK）]
[5]海青山，鄭梅，楊榆青，等炙甘草湯含藥血清對正常家兔離體主動脈環(huán)作用的研究云南中醫(yī)中藥雜志，2009，30（2）：51-53[ZK）]
[6]周承志，張道亮，王騰，等炙甘草湯含藥血清對兔心肌細胞鈣電流的影響[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2015，30（7）：468-471[ZK）]
[7]段富津方劑學[M].第6版上海：科學技術出版社，2000：135-136[ZK）]
【關鍵詞】 內質網; 衣霉素; 葡萄糖調節(jié)蛋白78; 凋亡促進因子CCAAT/增強子結合蛋白同源蛋白; 小鼠
內質網（endoplasmic reticulum， ER）廣泛存在于真核細胞中，是蛋白質合成、折疊、運輸以及細胞內鈣離子儲存的主要場所。內質網中鈣離子紊亂和未折疊蛋白質蓄積可引發(fā)內質網應激（endoplasmic reticulum stress， ERS），發(fā)生具有保護作用的未折疊蛋白反應（unfolded protein response， UPR）。內質網應激直接影響應激細胞的轉歸，如修復、損傷或凋亡。神經系統(tǒng)許多疾病與內質網應激相關。最近的研究表明，內質網應激介導的凋亡信號傳導途徑可能與阿爾茨海默病（Alzheimer disease， AD）的發(fā)病有關。本研究觀察滋補脾陰方藥（Zibu Piyin Recipe， ZBPYR）含藥血清對由N糖鏈抑制劑衣霉素（tunicamycin， Tm）引起的內質網應激的影響，以探討其神經保護機制。
1 材料與方法
1.1 實驗藥物 滋補脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，由紅參30 g，山藥15 g，茯苓15 g，白芍15 g，丹參12 g，白扁豆15 g，蓮肉20 g，石菖蒲10 g，遠志10 g，檀香4.5 g，橘紅9 g，甘草9 g組成，均購自大連醫(yī)藥集團藥材公司。中藥常規(guī)水煎，每毫升中藥液含生藥3.29 g，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2 主要試劑和儀器 達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基（Dulbecco's modified eagle's medium， DMEM)和胎牛血清，Gibco公司產品；胰蛋白酶和TRIReagent，Sigma公司產品；Tm，星形孢菌素（staurosporine， STS），日本Wako公司產品；細胞毒性檢測試劑盒，Roche公司產品；RNase OUT和Oligo (dt)，Invitrogen公司產品。二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，Thermo Forma公司產品；臺式高速冷凍離心機，Sigma公司產品；UV754紫外分光光度計，上海分析儀器總廠產品；溫度梯度PCR擴增儀，Thermo Hybaid公司產品；酶標儀，美國BIOTEKTM公司產品；凝膠成像分析系統(tǒng)，UVP公司產品。
1.3 中藥血清制備 取健康雄性SD大鼠（220～250 g）12只，隨機分為對照組和ZBPYR組，每組6只。適應飼養(yǎng)3 d后，ZBPYR組給予滋補脾陰方藥灌胃，10 ml/kg體質量，此劑量灌胃2次/d，連續(xù)3 d；對照組給予等體積生理鹽水灌胃。于末次給藥后1 h腹主動脈取血，靜置2 h，2 000 r/min，4 ℃離心15 min分離血清，離心半徑為16.1 cm，56 ℃，30 min滅活。0.22 μm濾膜過濾除菌，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 Neuro2a細胞的培養(yǎng) 小鼠神經瘤母細胞Neuro2a細胞株由日本北海道大學藥學部野村靖幸教授惠贈。細胞常規(guī)復蘇后加入培養(yǎng)液于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。細胞單層長滿后用終濃度為0.25%胰蛋白酶37 ℃條件下消化3 min，以1∶3傳代。培養(yǎng)液含90% DMEM、10%胎牛血清和1％雙抗。細胞長至第三代可以使用。
1.5 乳酸脫氫酶釋放試驗 Neuro2a細胞接種后分為對照組、10％空白血清組、5％ZBPYR組、10％ZBPYR組、15％ZBPYR組、Tm（5 μg/ml）組、10％空白血清＋Tm（5 μg/ml）組、5％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、10％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、15％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組。細胞單層長至70％時按以上分組給予相應刺激。刺激后細胞放入5％CO2、37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后用乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）釋放試驗檢測LDH泄漏率。LDH實驗步驟按試劑盒說明執(zhí)行。LDH泄漏率為細胞上清中LDH活性與細胞總的LDH活性比值。LDH活性測定用酶標儀于490 nm處檢測。另外Neuro2a細胞接種后分為對照組、STS（0.1 μmol/L）組、10％空白血清＋STS（0.1 μmol/L）組、15％ ZBPYR＋STS（0.1 μmol/L）組，待細胞單層長至70％時按以上分組給予相應刺激。刺激后細胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后檢測LDH泄漏率。
1.6 逆轉錄聚合酶鏈式反應 實驗分組同前。細胞單層長至90％時按以上分組給予相應刺激。細胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)6 h。總RNA的提取和逆轉錄聚合酶鏈式反應。（1）收集細胞用TRIReagent提取總RNA。用紫外分光光度計測定A260/A280，計算RNA濃度。（2）逆轉錄反應。反應體系為20 μl。取2 μg總RNA，加二乙基焦磷酰胺（diethyl pyrocarbonate， DEPC）水至總體積為9 μl，加0.5 μl Oligo (dt) 1218引物混合后，置70 ℃變性10 min。然后加入下列成分：5×第一鏈緩沖液5.875 μl、10 mmol/L dNTP 2 μl、0.1 mol/L DTT 2 μl、RNase抑制劑0.5 μl和逆轉錄酶0.125 μl，混合使反應總體系為20 μl。放入46 ℃反應1.5 h，70 ℃變性15 min，冰上5 min后進行擴增。（3）PCR反應。在0.2 ml PCR管中加入1.2 μl逆轉錄產物、sd H2O 9 μl、10 mmol/L dNTP 0.24 μl、10×PCR緩沖液1.2 μl、聚合酶0.12 μl、上游引物（20 μmol/L）0.12 μl、下游引物（20 μmol/L）0.12 μl，總反應體系為12 μl。（4）PCR產物觀察。PCR產物經40％丙烯酰胺凝膠電泳后，EB染色15 min，用凝膠成像系統(tǒng)進行拍照及圖像分析，然后計算待測基因與內標磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase， GAPDH)吸光度的比值。PCR反應擴增參數(shù)如下：葡萄糖調節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78， GRP78），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)22圈，72 ℃ 5 min；凋亡促進因子CCAAT/增強子結合蛋白同源蛋白（CCAAT/EBP homologous protein， CHOP），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)25圈，72 ℃ 5 min；GAPDH，94 ℃ 5 min，94 ℃ 40 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s，循環(huán)28圈，72 ℃ 5 min。引物序列見表1。
表1 引物序列（略）
Table 1 Sequence of the primers
1.7 統(tǒng)計學方法 每組實驗重復4次，圖像分析采用LabWorks 4.6專業(yè)圖像分析軟件。數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進行分析，兩組間差異比較采用t檢驗。
2 結果
2.1 LDH釋放試驗檢測ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后LDH泄漏率的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對照組相比，LDH泄漏率差異沒有統(tǒng)計學意義，說明血清對Neuro2a細胞沒有毒性作用；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，LDH泄漏率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；10％空白血清預處理組LDH泄漏率與Tm組相比，差異無統(tǒng)計學意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預處理組與Tm組相比，LDH泄漏率下降明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。10％藥物血清預處理組與10％空白血清預處理組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1。
2.2 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后GRP78 mRNA表達的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對照組相比，GRP78 mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義，說明血清對Neuro2a細胞GRP78 mRNA表達沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，GRP78 mRNA表達明顯增強(P＜0.05)；而加入血清預處理1 h后再加入濃度為5 μg/ml Tm各組與Tm（5 μg/ml）組相比，GRP78 mRNA表達明顯下降(P＜0.05)，其中ZBPYR含藥血清預處理組GRP78 mRNA表達較空白血清預處理組GRP78 mRNA表達下降更加明顯(P＜0.05)。見圖2。
2.3 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后CHOP mRNA表達的影響 各濃度含藥血清組與對照組相比，CHOP mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義，說明血清對Neuro2a細胞CHOP mRNA表達沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，CHOP mRNA表達增強（P＜0.05）；10％空白血清預處理組與Tm（5 μg/ml）組相比，CHOP mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預處理組CHOP mRNA表達與Tm（5 μg/ml）組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；10％藥物血清預處理組與10％空白血清預處理組相比，CHOP mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖2。
圖1 LDH檢測Tm刺激細胞后各組細胞LDH泄漏率（略）
Figure 1 LDH leakage from each group treated by Tm
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group (n=4 for each group).
圖2 RTPCR法觀察Tm刺激各組細胞后GRP78和CHOP mRNA表達（略）
Figure 2 Expressions of GRP78 and CHOP mRNAs in different groups treated by Tm (RTPCR)
Results of RTPCR electrophoresis from each group and values of IOD from each group (n=4 for each group). *P＜0.05， vs normal control group; P＜0.05， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group.
2.4 LDH釋放試驗檢測STS刺激Neuro2a后LDH泄漏率的變化 STS 0.1 μmol/L組與對照組比，LDH泄漏率升高（P＜0.01）；而加入15％空白血清預處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.05）；15％ ZBPYR含藥血清預處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.01）；15％ ZBPYR含藥血清預處理組與15％空白血清預處理組相比LDH泄漏率下降更加明顯（P＜0.05）。見圖3。
圖3 LDH檢測STS刺激細胞后各組細胞LDH泄漏率（略）
Figure 3 LDH leakage from each group treated by STS
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs STStreated group; P＜0.05， vs 15％ control serumtreated group (n=4 for each group).
3 討論
ERS是細胞的一種應激反應過程，糖饑餓、鈣平衡紊亂、糖基化抑制和二硫鍵合成減少等情況下，內質網的微環(huán)境發(fā)生改變，蛋白質的折疊受到影響，導致大量未折疊或錯誤折疊的蛋白質堆積于內質網內，由此引起一系列以分子伴侶和折疊酶表達上調為標志的應答反應，稱為未折疊蛋白反應（unfolded protein response， UPR）。通過UPR細胞才能在應激情況下存活。分子伴侶GRP78與凋亡促進因子CHOP是ERS時表達增多的兩種分子，被看作是ERS的標志，在ERS中起著不同的作用。其中GRP78能保護細胞，而CHOP則是促進細胞凋亡。因此通過藥物干預后研究它們的表達情況可以進一步了解藥物對ERS的作用。AD是一種常見的神經退行性疾病，病理特征為淀粉樣蛋白的沉積、神經原纖維纏結、tau蛋白異常磷酸化和區(qū)域選擇性神經元死亡［1］。AD與基因突變有關，主要有編碼淀粉樣蛋白前體基因（amyloid protein precursor， APP）和早老素（presenilin， PS）基因，這些基因都與內質網有關。AD相關的早老素突變，誘導內質網應激反應并且通過改變APP的蛋白水解加工作用而部分地增強對應激誘導的凋亡的易損性。PS1突變通過細胞表面有活性的鈣離子流入的直接減少，不依賴APP，并間接地通過APP處理作用和淀粉樣肽的產生增加內質網鈣離子釋放來解除對神經元鈣離子穩(wěn)態(tài)的控制。這種鈣離子穩(wěn)態(tài)的干擾將改變APP的加工，過量生成β淀粉樣蛋白142(amyloid βprotein 142， Aβ142)，同時內質網鈣失衡，激活鈣蛋白激酶，切割內質網膜上的caspase12，從而激活caspase12介導的內質網特異性凋亡路徑，最終形成AD的病理變化［2］。除了鈣離子失調，PS突變下調UPR并增強對內質網應激的易損性［3］。PS1突變還誘導了一個內質網中與應激介導的凋亡途徑有關的凋亡前因子CHOP的表達［4］。PS是γ分泌酶復合物的一部分，與β分泌酶一起，裂解APP產生Aβ，并且PS突變增加總Aβ和Aβ142的產生。Aβ能直接引發(fā)內質網的鈣離子釋放并且誘導了內質網應激和神經毒性［5］。因而，在AD中內質網應激是引發(fā)和調節(jié)神經元死亡的一個主要事件。現(xiàn)有研究顯示在AD神經元死亡中內質網應激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑相互影響，起著調控凋亡級聯(lián)反應的作用［6］。中醫(yī)認為人體的生長、發(fā)育和衰老與“腎”密切相關。“腎精虛衰”是衰老的主要原因。同時又認為“脾胃為血氣陰陽之根蒂”，“脾胃既和，其人壽；脾胃不和，其人夭”，因此也重視奉養(yǎng)脾胃精氣在延年中的作用［7］。老年癡呆發(fā)病于老年期。老年期脾胃氣衰，飲食減少，脾虛則化源不足，腦髓失養(yǎng)，神機失調而發(fā)為本病。因此脾虛是老年性癡呆的基本病機，脾的功能衰退在老年性癡呆發(fā)病過程中起著主導作用，并貫穿于全過程［8］。脾的生理功能是脾之陰陽共同作用的結果。脾陰是指存在于脾臟的陰液（包括血、津液和水谷精微等）和脾的物質形態(tài)及其滋潤濡養(yǎng)功能。由于脾與大腦關系密切，脾陰虧虛嚴重影響大腦的意識、學習、思維、記憶和情緒等功能，導致一系列與腦相關的精神意識病證如意識不清、學習記憶能力下降和情緒失常等。因此，滋補脾陰應當是防治老年癡呆的一個重要措施。滋補脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，以人參補脾益氣生津，山藥益胃補脾養(yǎng)陰，白芍養(yǎng)陰緩急，丹參活血養(yǎng)血益陰，茯苓健脾安神益智等，共奏健脾益陰之效。本組以往的研究顯示，滋補脾陰方藥能通過改善老齡大鼠腦細胞線粒體膜Na+K+ATP酶、Ca2+Mg2+ATP酶活性，調節(jié)膜磷脂代謝障礙和修飾膜的作用［9］，以及延緩興奮性氨基酸受體N甲基D門冬氨酸（NmethylDaspartic acid， NMDA）受體、γ氨基丁酸（gammaaminobutyric acid， GABA）受體染色陽性神經元在衰老過程中喪失，同時抑制神經膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein， GFAP）的表達，起到神經保護、延緩腦衰老的作用［10］。本實驗中Tm刺激Neuro2a細胞LDH釋放試驗結果表明，在加入滋補脾陰方藥含藥血清預保護后，可以明顯降低Tm刺激細胞后的LDH泄漏率，結合RTPCR觀察到滋補脾陰方藥含藥血清預處理后，內質網應激標志物GRP78及CHOP mRNA的表達受到抑制，兩種實驗結果的同步性可以推斷滋補脾陰方藥具有抑制內質網應激的作用。STS刺激Neuro2a細胞LDH釋放試驗結果表明，加入滋補脾陰方藥含藥血清預處理后，可以明顯降低STS刺激細胞后的LDH泄漏率（STS是線粒體凋亡途徑誘導劑）。因而表明滋補脾陰方藥同時具有保護線粒體損傷的作用。以上的研究結果為滋補脾陰方藥應用于臨床防治AD提供了依據(jù)。AD是一種常見的神經退行性病變，其發(fā)病機制復雜，目前尚無有效的治療手段，對社會和人們的生活造成嚴重的負擔。現(xiàn)有的研究表明，神經元的凋亡在AD的發(fā)病過程中起著重要的作用。而內質網應激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑已被證明在AD的發(fā)病過程中起著協(xié)同作用。我們的實驗證明，滋補脾陰方藥對內質網應激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑具有雙重作用，因而有助于AD的防治，加之中藥治療有著毒副作用低、經濟實惠的優(yōu)點，更易于為人們所接受。
【參考文獻】
1 Mattson MP. Pathways towards and away from Alzheimer's disease. Nature. 2004; 430(7000): 631639.
2 Nakagawa T， Zhu H， Morishima N， et al. Caspase12 mediates endoplasmic reticulumspecific apoptosis and cytotoxicity by amyloidbeta. Nature. 2000; 403(6765): 98103.
3 Yasuda Y， Kudo T， Katayama T， et al. FADlinked presenilin1 mutants impede translation regulation under ER stress. Biochem Biophys Res Commun. 2002; 296(2): 313318．
4 Milhavet O， Martindale JL， Camandola S， et al. Involvement of Gadd153 in the pathogenic action of presenilin1 mutations. J Neurochem. 2002; 83(3): 673681.
5 Suen KC， Lin KF， Elyaman W， et al. Reduction of calcium release from the endoplasmic reticulum could only provide partial neuroprotection against βamyloid peptide toxicity. J Neurochem. 2003; 87(6): 14131426.
6 Takuma K， Yan SS， Stern DM， et al. Mitochondrial dysfunction， endoplasmic reticulum stress， and apoptosis in Alzheimer’s disease. J Pharmacol Sci. 2005; 97(3): 312316．
7 Li ZP， Zhao WK， Xu PC， et al. Effects of recipes for replenishing qi and activating blood on senescence related gene expressions in the liver of aging rats. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2005; 3(5): 370373. Chinese with abstract in English.
黎志萍， 趙偉康， 徐品初， 等. 益氣活血方藥對老年大鼠肝臟衰老相關基因表達的影響. 中西醫(yī)結合學報. 2005; 3(5): 370373.
8 Zhao WY， Chen R. Applying treatment to senile dementia based on differentiation of spleen syndrome. Zhong Yi Yao Xue Kan. 2005; 23 (9): 16651666. Chinese.
趙文研， 陳榮. 從脾論治老年性癡呆癥. 中醫(yī)藥學刊. 2005; 23(9): 16651666.
9 Zhan LB， Xu F， Dong YK， et al. Effect of the prescription nourishing the Piyin (PNPY) on the brain mitochria menbrane ATPase activity of senile rats. Zhong Yao Yao Li Yu Lin Chuang. 2000; 16(1): 2425. Chinese with abstract in English.
大膽運用對比色
邀請函能讓賓客形成對婚禮的第一印象，因此，混合使用那些大膽的色彩，如艷粉、深藍或者是花式字體將會形成強烈的視覺沖擊力，帶來很不錯的效果。
添加3d效果
把這些現(xiàn)代元素注入婚禮邀請函中，讓它呈現(xiàn)出更多立體效果，如在卡片上點綴一些閃耀發(fā)光的心型裝飾物，或者用經過特殊處理的鮮花裝扮邀請函，或者在卡片上添加綢緞的蝴蝶結等。
保留郵票
在邀請函上用一個特別的紀念郵票。譬如：有經典圖案或是有代表意義的郵票，你們還可以利用相關網站，設計自己喜歡的郵票風格。
親手制作地圖
制作一個手繪的個性化地圖，標注出你們最中意的婚禮場地是個不錯的選擇，這樣，也可以大大節(jié)省制作成本。
我的未婚夫是個汽車發(fā)燒友，所以我決定把請柬做成賽車明信片的樣子。首先，我把汽車公路賽的示意圖印在上面，在上面標出教堂和宴會的大概位置。在公路賽的起點，我和他分別被畫做賽車的車頭和車尾，經過了一段短暫的路程，我們結合了，最終在終點站我們合并成為一輛漂亮完整的小汽車！
rachel XX.4.24
我們兩個都非常喜歡看電影，不如把我們的婚禮作為一場電影，而要吸引觀眾來看，就首先要他們看一下宣傳短片，然后如果他們喜歡才會買票來電影院觀看電影。
按照此思路，我們制作了一個dvd短片作為邀請函。我們將歷史上幾個最經典的銀幕之吻刻錄其中，再配上一個我和他的熱吻。噢，其實我們并沒有吻上。接著，一個深沉的聲音響起來，如果你想看我們真正的熱吻，就快來參加我們的婚禮吧！短片最后的演職員表里是我們的名字、婚禮時間和地點等相關信息。
以電影票的形式制作了回函卡，上面留有空間可以寫下被邀請人的姓名；如果他確認能來，就打一個v，并寫上會帶幾個人人參加。
mandy XX.10.11
我收藏了許多行李托運標簽用來制作美麗的邀請函，在標簽上方的小孔上，用絲線將一片薄荷葉系在標簽上，這樣的邀請函是不是很特別呢？
marsha XX.5.1
我和他第一次見面是在一個美麗的植物園，于是我決定就用這個主題來制作邀請函。我買來紙張，接著去那個小花園采來野花和小草，將它們制成標本貼于紙上。當然我不會忘了附上一小枝一串紅，那是我對每位嘉賓最真摯美好的祝福。
meredith XX.5.5
當然，在邀請函上我也動了不少心思，每張邀請函都是我特別制作的。而后我買來漂亮的絲綢小盒子來放我的邀請函，每個盒子里還放了一小包花籽，還有一枝薰衣草。最終功夫不負苦心人，所有的嘉賓都非常喜歡我的小制作。我的幾位好朋友甚至把空盒子放在家里的展示柜里作為永久的紀念。
婚禮邀請函范文
送呈：xxx先生臺啟
公歷年月日
謹訂于（星期日）
農歷年月日
為***先生和**小姐舉行結婚典禮敬備喜筵
關鍵詞：任務情境；創(chuàng)設原則；探究學習
在任務驅動教學法中，任務設計是核心，圍繞著任務而創(chuàng)設的情境是有效實施任務驅動的基礎。文章以計算機基礎教學為例，對任務情境創(chuàng)設進行探討。
任務情境創(chuàng)設的原則
任務驅動教學的展開，起始于有效任務情境的設計。任務驅動式教學必須依賴于恰當?shù)娜蝿涨榫巢拍苷{動學生的積極性，主動參與到任務的確立、分析等活動中，才能充分發(fā)揮學生的主體性，實現(xiàn)學生意義的建構。要創(chuàng)設理想的任務情境，我們應遵循以下幾個原則。
1.目標性原則
任務情境與教學目標相聯(lián)系。先選擇典型的教學內容，然后根據(jù)教學目標創(chuàng)設任務情境。
2.貼近生活原則
任務情境與現(xiàn)實生活相適應。教師所創(chuàng)設的任務情境要適應學生真實的生活環(huán)境，結合學生日常熟悉的生活情境，加強學習內容與生活的聯(lián)系，調動學生主體性的積極發(fā)揮。
如創(chuàng)設“撰寫競選自薦信”、“制作個人簡歷”、“分析班級學期成績”及 “學校形象宣傳”等情境。
3. 貼近專業(yè)原則
任務情境與學生所學專業(yè)相適應。教師所創(chuàng)設的任務情境要適應學生所學的專業(yè)，關注行業(yè)，結合專業(yè)。 如 “制作動漫節(jié)邀請函”等任務情境。
4. 學生主體性原則
任務情境與學生已有知識經驗相聯(lián)系。從學生已有的知識結構出發(fā)，把情境置于學生的最近發(fā)展區(qū)，使知識的學習過程形成階梯式的上升過程。如，創(chuàng)設“制作宣傳手冊”、“企業(yè)產品推介”等任務情境。
任務情境創(chuàng)設的步驟
貼近學生學習、生活及將來就業(yè)的場景進行情境創(chuàng)設。以“制作校園動漫節(jié)邀請函”任務為例，任務情境的創(chuàng)設步驟如下：
1.根據(jù)學習目標，分析任務內容
本單元的學習目標主要為郵件合并、頁眉頁腳設置、項目符號與編號設置。學習目標的重點難點是郵件合并，郵件合并的主要功能是生成批量文檔。任務定位為批量文檔的生成。
2.結合學生生活（或專業(yè)）， 分析任務形式
筆者所教班級專業(yè)為動漫專業(yè)，結合專業(yè)活動，將任務定位為“校園動漫節(jié)邀請函”。
3.結合已有知識，確定任務具體要求
學校將舉辦校園動漫節(jié)，現(xiàn)需要制作一批動漫節(jié)邀請函，并郵遞分發(fā)。
任務情境在教學實施中的效果
以制作校園動漫節(jié)邀請函為例。任務情境在教學實施中起到顯著的效果。
1.調動學生學習積極性
此任務情境把學生帶入真實場景。學生在教學過程中發(fā)揮主動性，以主人翁的身份，體驗完整的工作過程――“資訊―計劃―決策―實施―檢查―評估”。首先，在老師的指導下，討論分析制作邀請函的格式和要求，明確任務；其次，完成任務；最后，通過檢查評估，修改完善作品。
2. 自主探究，培養(yǎng)學習能力
任務實施階段分為兩大階段，第一階段，因學生已具備一定的文檔編輯和格式設置能力，在原有知識的基礎上，通過自學及小組討論完成表-1中子任務（1）――制作邀請函文檔和子任務（3）――制作邀請函封面。第二階段，是新知識的學習。學生通過看書、查看教學視頻等學習資源，小組討論、自主探究郵件合并等知識技能，完成子任務（2） ――通過郵件合并生成批量邀請函及子任務 （4） ――制作一批信封標簽。培養(yǎng)了學生的探索和自學能力。
3.真正發(fā)揮學生在學習活動中的主動性
⒈ 封面 通常會展活動商務邀請函的封面會顯示此商務函的性質。普通的商務邀請函（信）封面以會展活名稱、主題、主辦機構、時間、地點五項內容為主；而特殊的商務邀請函（信）。則在封面上只注明會展活動組織者或項目的名稱、收信機構或人員的相關信息并注明“通知、特函、”等字樣。
⒉ 標題 由會展活動名稱和“邀請函（書）或（信）”組成。
會展活動名稱可以分為三個部分：基本部分、限定部分和附屬部分。其中基本部分和限定部分構成展覽會名稱的主體。例如：第十屆中國家電產品博覽會邀請函（信）、第十二屆中國國際機床機電展覽會邀請函（信）。
⒊ 稱呼 邀請函的發(fā)送對象有三類情況：
（1）發(fā)送到單位的邀請函，應當寫單位名稱。由于邀請函是一種禮儀性文書，稱呼中要用單稱的寫法，不宜用泛稱（統(tǒng)稱），以示禮貌和尊重。
（2）邀請函直接發(fā)給個人的，應當寫個人姓名，前冠“尊敬的”敬語詞，后綴“先生”、“女士”、“同志”等。
（3）網上或報刊上公開的邀請函，由于對象不確定，可省略稱呼，或以“敬啟者”統(tǒng)稱。
⒋ 正文 正文應逐項載明具體內容。
第一部分背景說明。寫明舉辦會展活動的背景和目的；
第二部分組織說明。對會展活動組織結構的進行介紹，包括的主辦者、協(xié)辦者、承辦者等；
第三部分是時間與地點。根據(jù)會展活動設定的舉辦日期、結束日期與舉辦城市、地點進行描述。
第四部分是會展活動的具體內容介紹。
主要包括了會展活動的展區(qū)劃分、展品設定、同期活動、展示服務、會展活動的特點、會展活動的收費標準等相關內容；第五部分聯(lián)絡信息。寫明聯(lián)系聯(lián)絡信息和聯(lián)絡方式，包括傳真、電話、郵箱、負責人等。結尾處也可寫“此致”，再換行頂格寫“敬禮”，亦可省略。
⒌ 回執(zhí) 回執(zhí)是被邀請方根據(jù)需要和可能而給予的一種反饋信息。通常會展活動的回執(zhí)內容格式統(tǒng)一的會展組織者進行制定。包括了：參與者單位信息、參與類型、具體展位或廣告位、會議活動預定事項、參與人員信息、參與時報到信息說明等。
⒍ 落款 會展活動邀請函的落款，通常是會展活動的組織機構名稱加蓋相關印章。如果是多家機構共同主辦或承辦，則由多家機構共同簽名蓋章。以證明此邀請函（信）的真實性與合法性。同時注明邀請函（信）的制作時間。
